En primer lugar, tanto EcoR1 como Xba1 dejan salientes de 5' cuando digieren el ADN (al igual que Nde1). En ambos casos el extremo 3' está retranqueado por lo que la poliermasa puede añadir bases. En segundo lugar, todas las polimerasas solo pueden agregar bases a un extremo de 3', por lo que Klenow agregará 4 bases al extremo de 3' retrocedido de ambos sitios para generar extremos romos.
¿Las enzimas de restricción dejan un 5 fosfato?
Los vectores e insertos digeridos por enzimas de restricción contienen las modificaciones terminales necesarias (5' fosfato y 3' hidroxilo), mientras que los fragmentos creados por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) pueden no tenerlas.
¿Se pueden ligar los extremos romos?
Ligadura de extremos romos
La ligadura de extremos romos no implica el emparejamiento de bases de los extremos que sobresalen, por lo que cualquier extremo romo puede ligarse a otro extremo romo. Las enzimas de restricción como SmaI y EcoRV pueden generar extremos romos.
¿La polimerasa Taq produce extremos romos?
Sí… Taq Polymerase agrega A-Overhangs si mantiene el paso de extensión final a 72 dC en PCR. Se utiliza principalmente para la clonación TA.
¿Por qué utilizar el fragmento Klenow en la secuenciación del ADN?
El fragmento Klenow es extremadamente útil para tareas de investigación como: Síntesis de ADN de doble cadena a partir de plantillas de cadena sencilla . Rellenar los extremos 3' hundidos de los fragmentos de ADN para hacer que el saliente 5' sea romo . Digerir los salientes de 3' que sobresalen.
