Los artefactos de dímero cebador normalmente ocurren en un número de ciclo de umbral grande (generalmente > 35 ciclos), que es más alto que el número de ciclo de umbral para el amplicón deseado. Los dímeros de cebadores aumentan notablemente cuando se agrega ADN genómico heterólogo.
¿Dónde vería los dímeros de cebador en un gel de ADN?
En la PCR de punto final no cuantitativa, el dímero del cebador aparecerá como una mancha más o menos tenue en un gel de agarosa, por debajo de la banda del producto de interés.
¿Cómo se forman los dímeros de cebadores?
Los dímeros de cebadores se forman cuando dos cebadores se unen entre sí, en lugar de al ADN molde, debido a regiones de complementariedad de cebadores.
¿Cómo se detectan los dímeros de cebadores?
La forma más fácil de verificar si hay dímeros de cebadores es comparar sus reacciones con su control negativo (agua en lugar de ADN o ARN). Se seguirán formando dímeros de cebadores en el control negativo. Algunos conjuntos de cebadores tienen más probabilidades de formar dímeros que otros.
¿Por qué aparecen los dímeros de imprimación?
La mayoría de los dímeros de cebadores se ven debido a la alta concentración del cebador en la mezcla de reacción de la PCR. O si no hay amplificación por PCR y se puede ver en el dímero de cebador en el gel de agarosa. Si puede ver el producto de la PCR, puede reducir la concentración de la preparación y mantener las demás condiciones iguales.
