La tripsinización es el proceso de disociación celular que utiliza la tripsina, una enzima proteolítica que descompone las proteínas, para disociar las células adherentes del recipiente en el que se cultivan. Cuando se agrega a un cultivo celular, la tripsina descompone las proteínas que permiten que las células se adhieran al vaso.
¿Por qué tripsinizamos las células?
La tripsinización a menudo se realiza para permitir el paso de las células a un nuevo recipiente, la observación para la experimentación o la reducción del grado de confluencia en el matraz mediante la eliminación de un porcentaje de las celdas.
¿Cómo funciona la tripsina para separar las células?
Trypsin/EDTA es un método combinado para separar células. La tripsina corta las proteínas de adhesión en las interacciones célula-célula y célula-matriz cortando el aminoácido de las proteínas de adhesión específicamente en la lisina o aginina en C-terminal si el aminoácido anterior no es prolina.
¿Cómo se obtienen células adherentes tripsinizadas?
Procedimiento
- Retirar el medio del recipiente de cultivo por aspiración y lavar la monocapa con una solución salina libre de Ca2+ y Mg 2+ para eliminar todos los restos de sérum. …
- Dispense suficiente tripsina o solución de tripsina/EDTA en los recipientes de cultivo para cubrir completamente la monocapa de células y colóquela en una incubadora a 37 °C durante ~2 minutos.
¿Cómo desactivo la tripsina en un cultivo celular?
Una vez que las celdas aparecen separadas, agregue 2 volúmenesde medio de cultivo completo precalentado para inactivar la tripsina. Disperse suavemente el medio pipeteando sobre la superficie de la capa celular varias veces para asegurar la recuperación del >95 % de las células. Para cultivos libres de suero, inhibidor de tripsina de soja (Producto No.
