También puede desalar su muestra por ultrafiltración a 1 décima del volumen anterior, diluir nuevamente y repetir el paso UF. El mejor método para la desalinización es desalinización por filtración en gel contra tampón 50 mM, que ultrafiltración (clásica, no centrífuga).
¿Qué es la desalinización en la purificación de proteínas?
La desalinización se utiliza para eliminar las sales de las soluciones de proteínas, el fenol o los nucleótidos no incorporados de los ácidos nucleicos o el exceso de reactivos de entrecruzamiento o marcado de las proteínas conjugadas.
¿Cómo se purifican las proteínas?
En la purificación de proteínas a granel, un primer paso común para aislar proteínas es la precipitación con sulfato de amonio (NH4) 2SO4. Esto se realiza añadiendo cantidades crecientes de sulfato de amonio y recogiendo las diferentes fracciones de proteína precipitada. Posteriormente, el sulfato de amonio se puede eliminar mediante diálisis.
¿Cómo amortiguas las proteínas de intercambio?
El cambio de tampón, sin embargo, se realiza primero equilibrando la resina de la columna con el tampón en el que debe terminar la muestra. En ambos casos, los componentes del tampón que llevan la muestra a la columna será reemplazada por la solución con la que la columna está preequilibrada.
¿Cuál de las siguientes técnicas de cromatografía se puede aplicar para desalinizar proteínas?
Como se mencionó anteriormente, la filtración en gel se puede utilizar de manera efectiva para obtener proteínasdesalinización y se logra primero equilibrando la columna de filtración de gel con agua. Sin embargo, el intercambio de tampones se logra equilibrando primero la resina de la columna con el tampón objetivo.
